豬胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）使用說明書

【產品名稱】
通用名：豬胸膜肺炎放線菌ApxⅣA抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Actinobacillus Pleuropneumoniae ApxⅣA (ELISA)
豬胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體檢測試劑盒【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus Pleuropneumoniae，APP）引起的一種高度傳染性呼吸道疾病，以急性出血性纖維素性胸膜肺炎和慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征。APPzui主要的毒力因子為Apx毒素，其中ApxⅣA毒素在所有血清型中都存在。
    本試劑盒檢測豬血清、血漿樣品中ApxⅣ抗體，可用于胸膜肺炎放線桿菌感染的診斷。
【原    理】
    本試劑盒系由預包被胸膜肺炎放線桿菌（APP）抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣品中胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體。實驗時在酶標板孔中加入待檢樣品，經溫育后若樣品中含有胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體，則與酶標板上抗原結合；經洗滌除去未結合的其他成分后加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，加入底物液A、B，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后產物變為；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體。
【試劑盒組成】 

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陽性對照按10倍稀釋，陰性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰性對照孔加入陰性對照100μl；陽性對照孔加入稀釋好的陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.15，陽性對照≥0.4。
【檢驗結果的解釋】
豬血清樣品中胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體的有(陽性)無(陰性)通過計算樣品與陽性對照吸光度的比值（S/P值）來判定。
1.S/P=樣品A值/陽性對照比值。
2.S/P≥1為ApxⅣA抗體陽性；S/P＜1為ApxⅣA抗體陰性。
【試驗方法的局限性】
    該試驗僅作為定性檢測豬胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣA抗體。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。